Jumlah Penduduk Kota Ambon Tahun 2024 sebanyak 357.289 jiwa, terdiri atas penduduk laki laki sebanyak 177.309 jiwa dan penduduk perempuan sebanyak 180.250 jiwa.
Jumlah Penduduk Kota Ambon tersebar pada lima wilayah kecamatan dengan presentasi tertinggi berada pada Kecamatan Sirimau sebesar 42% atau sebesar 148.742 jiwa dan Kecamatan Nusaniwe sebesar 25% atau sebesar 91.574 jiwa.
Untuk itu dikeluarkannya Surat Keputusan Walikotamadya Kepala Daerah tingkat II Ambon tertanggal 10 Juli 1972 nomor 25/KPTS/1972 yang diubah pada tanggal 16 Agustus 1972, yang isinya mengenai pembentukan Panitia Khusus Sejarah Kota Ambon dengan tugas untuk menggali dan menentukan hari lahir kota Ambon. Kemudian dengan suratnya tertanggal 24 Oktober 1972 nomor PK. I/4168 selaku Panitia Khusus Sejarah Kota Ambon menyerahkan tugasnya itu kepada Fakultas Keguruan Universitas Pattimura untuk menyelenggarakan suatu seminar ilmiah dalam rangka penentuan hari lahir Kota Ambon.
Penduduk Kota Ambon berdasarkan struktur usia, didominasi oleh kelompok usia produktif yaitu kelompok penduduk berusia 15 sampai 65 tahun dengan jumlah sebesar 254.962 jiwa atau sebesar 71,36%. Kelompok usia produktif tersebut terdiri atas laki laki sebanyak 125.918 jiwa atau sebesar 49,39% dan perempuan sebanyak 129.044 jiwa atau sebesar 50,61%